小鼠畸胎瘤细胞（P19）

小鼠畸胎瘤细胞(P19)
细胞介绍
加拿大渥太华大学的Me Burney等在1982年从雄性小鼠畸胎瘤中分离得到的，是一种能够在体外培养的多能干细胞,P19细胞团经RA诱导可分化成神经元、胶质细胞和纤维母细胞；而经二甲基亚砜(DM SO)诱导则分化成心肌、骨骼肌和平滑肌细胞;在P19细胞向神经元分化的过程中，神经发育相关基因的表达模式 基本模拟了正常小鼠神经发育过程，因此,P19目前被用作一个研究神经发育的 体外模型。P19细胞作为研究神经分化机制的模型，显著区别于其他细胞系的四 大特点是：①它具有正常小鼠的二倍体核型，细胞分裂快，可在体外迅速大量扩 增，多次传代也不丧失其分化能力。②P19细胞具有多种分化潜力，不同诱导条 件下可定向分化成不同类型的细胞，种植到孕鼠囊胚中能分化成多种类型细胞。 ③根据P19细胞诱导分化分阶段进行的特点，能将神经分化的早期机制与参与 突起延伸的机制分开研究。④该细胞易于转染，且转染后仍能正常分化，适于进 行细胞基因研究。通过转染正常或突变的目的基因，增强或抑制它们的表达水平 可用于研究这些基因在神经分化中的作用。另外，利用反义RNA阻断内源蛋白 的表达，可用来观察这些蛋白在神经分化中的作用。
(references:
1.张金平等.全反式维甲酸体外诱导P19细胞向心肌方向分化.[」]中国组织化学与 细胞化学杂志.2012.1
2.梅宇钦等.建立经优化的促P19鼠胚胎癌细胞神经分化模型.浙江大学学报（医 学版）2012.04)
 
细胞特性
1)来源：胚胎；崎胎癌
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
运输和保存：可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式：（1)干冰运输，收到后 立即转入液氮冻存或直接复苏；（2)存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细 胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
细胞用途：仅供使用。
 
小鼠畸胎瘤细胞(P19)细胞培养步骤
一.培养基及培养冻存条件准备：
1.准备MEMa培养基(MEMa+培养基(GIBCO,添加NaHC〇31.5g八，肌醇43.2mg八，叶酸8.82mg八,0-巯基乙醇7.8mg八)，90%; BCS，7.5%;胎牛血清，2.5%。
2. 培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%*培养基，10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二.细胞处理：
复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37°C水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检 查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2■加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37C培
养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
 
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL 培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
 
细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液（防止细胞吸走)，加 入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻 存。
 
小鼠畸胎瘤细胞(P19)注意事项：
收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们电联。
所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。