小鼠正常肝细胞（NCTC 1469）

小鼠正常肝细胞(NCTC 1469)
细胞介绍
1952年建系，源于正常C3H/An小鼠的肝脏组织，表达H-2K抗原，鼠痘病毒阴性。细胞特性
1)来源：小鼠的肝组织
2)形态：上皮细胞样
3)含量：>lxl06个/mL
4)污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格：T25瓶或者lmL冻存管包装
 
细胞接受后的处理：
1.收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。
2.请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37°C培养约2-3h〇
3.弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的*培养基。
4.如果细胞长满（90%以上）请及时进行细胞传代，传代培养用6ml本公司附 带的*培养基。
5.接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我 们取得电联。
细胞用途：仅供使用。
 
小鼠正常肝细胞(NCTC 1469)本公司的细胞培养操作规程，供参考
1)培养基及培养冻存条件准备：
1.准备DMEM培养基(DMEM，GIBCO);马血清，10%;双抗
1%。
2.培养条件：气相：空气，95%;二氧化碳，5%。温度：37°C，培养箱湿度为70%-80%。
3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
2)细胞处理：
复苏细胞：将含有lmL细胞悬液的冻存管迅速放入37°C水浴中（水面要低 于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入lmL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。 第二天换液并检查细胞密度。
细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
 
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
力口 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培养瓶中，置于37°C培
养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部 分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3ml此细胞的 培养基终止消化。
轻轻吹打后吸出，移入15ml离心管中，在1000RPM条件下离心4分钟， 弃去上清液，加入lmL培养液后吹匀。
移入到事先准备好的含有5ml培养基的T-25培养瓶中或含有14ml培养 基的T-75培养瓶中培养。
细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
 
下面T25瓶为例；
细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入lml胰酶，细 胞变圆脱落后，加入2ml*培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至终浓度为 10%。加入DMSO后迅速混匀，按每lml的数量分配到冻存管中，注意冻存 管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
 
小鼠正常肝细胞(NCTC 1469)注意事项：
收到细胞后，若发现干冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们电联。
所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。