1. ELISA试剂盒收取10~50 g 新鲜的植物安排。
2. 植物安排用冷的无菌水洗刷、吸干,放人液氮中冻结,用研钵和研杵研成细粉。
3. 将冻结的细粉放入250 ml 的离心瓶中,立即参加抽提缓冲液约每克植物5~10 ml,轻轻搅拌混匀。
4. 参加十二烷基肌氨酸钠使终浓度达1%,于温育1~2 h。
5. 用JA-14转子4℃,5 500 g 离心10min 保存上清,必要时重复此歩骤以除掉残渣。
6. 加人0.6体积yi丙醇,混合,假如看不见沉积,于-20℃放置30 min,用JA-14转子4℃,7 500 g 离心15 min,弃上清。
7. ELISA试剂盒沉积用9 ml TE缓冲液重悬,参加9.7 g 固体氯化铯,混匀,冰上放置30 min,用JA-14转子,7 500 g 离心10 min,保存上清。
8. 参加0.5 ml 10 mg/ml 的溴化乙锭,冰上放置30 min,4℃ 7500 g 离心10min.
9. 将上清转入两个5 ml 的快封超离心管中,并封口。
10. 用VTi80转子20℃ 525 000 g 离心4 h,或20℃,300 000 g 离心,用15号针头和注射器收集带。
11. 用氯化艳饱满的yi丙醇重复抽提DNA以除掉溴化乙锭。
12. 参加2体积水和6体积100%乙醇,混匀,-20℃放置1 h,用JA-20或JA-21转子4℃,7500 g 离心10 min。
13. 沉积用TE缓冲液重悬,参加1/10体积的3 mol/l 乙酸钠和2体积的100%乙酵重悬,重复离心。
14. 沉积晒干后用TE缓冲液重悬ELISA试剂盒。