ELISA试剂盒的好坏会直接影响ELISA实验的结果,有的时候ELISA试剂盒会出现变质的情况,那么,是什么原因造成ELISA试剂盒变质呢?今天我们就来介绍一下ELISA试剂盒变质的原因。
1、方法学的影响
ELISA测定模式包括以下几种:双抗体夹心法、间接法、双抗原夹心法、IgM抗体捕捉法、竞争抑制法,其中竞争抑制法(HBeAb,HBcAb等采用)因受操作时差所引起的竞争等因素的影响,结果重复性较差,质量较难控制。所以说,各种实验方法在操作过程中可能会导致ELISA试剂盒变质。
2、试剂因素
不同批次的ELISA试剂在制作过程中很难保证质量一致,即使是通过批批检验的项目其检测结果也存在差异,因此必须选择和订购长批号的试剂,并保证保存条件。严格执行这一标准可以避免因试剂批号改变而重新建立质控体系及重新评估试剂的复杂过程,并且能够保证结果的稳定性。对于效期短、使用率低的试剂,应当小量分装,每次使用则取分装部分即可,避免反复冻融造成试剂的失效。
3、样本因素
标本干扰因素包括内源性干扰因素和外源性干扰因素,前者包括类风湿因子、补体、异嗜性抗体、自身抗体、等,后者包括标本溶血、标本被细菌污染、标本贮存时间过长、标本凝固不全、冷冻标本的反复冻融等。
4、操作因素
ELISA操作步骤复杂,操作不当将引起较大的误差。加样、温育、洗涤、显色、比色。这些步骤在操作过程中,操作不当或者操作时间过长都有可能造成ELISA试剂盒的变质。
5、常表示结果的常用方法
⑴.定性测定。
⑵.半定量测定 结果一般以滴度表示。
⑶.定量测定 即用已知量的标准品作一系列稀释后进行ELISA测定,绘制标准曲线,结果以量或单位表示。在ELISA定量检测中每一块反应板都必须绘制相应的标准曲线。
ELISA实验过程复杂,影响因素较多,而ELISA试剂盒的有效性是ELISA实验能够顺利进行的前提,因此在实验过程中要细心操作,安全保存各种试剂,加大复查力度,确保实验结果的准确。
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以上是介绍ELISA试剂盒变质的原因有哪些?