我们在做一项实验的时候，需要了解的步骤与所需物品是*的。而今天，上海酶联这里要给朋友们分享的就是实验制得细胞的样本，您需做好下文中的这六步两注意。所谓的六步两注意也就是操作的六个步骤，和两条注意事项，下面我们就来详细的看看吧。

实验之前，我公司的技术人员为朋友们特别准备说明了所需的物品有哪些：
1、培养基；不含酚红的DMEM培养基
2、处理玻片：将多聚赖氨酸溶液（溶于1mol/L pH7.0 Tris-HCl缓冲液中），涂布于玻片上，干燥后即可使用。或者APES 2ml溶于100ml丙酮中，将玻片浸泡入内，取出晾干，180℃干燥备用。
3、洗涤液；0.1M，pH7.2～7.4PBS
4、细胞固定液：4%多聚甲醛0.1MPBS(pH7.2～7.4)含有1/1000 DEPC。
5、乙醇：70%  90%  100%
6、胃蛋白酶溶液：用0.1N HCl将其稀释为100μg/ml
7、设备：烤箱，CO2培养箱，倒置显微镜，玻璃载玻片，原位杂交盖玻片，温箱，加样器和吸头等。
操作步骤：
1、在37℃ 5% CO2条件下将细胞加在处理的载玻片上，用培养基培养，时间通过预实验确定；
2、细胞长好后，用洗涤液洗2分钟×3次，室温下将其放入细胞固定液中固定30-60min，蒸馏水洗涤；
3、室温下用洗涤液充分洗涤固定细胞，（干燥后-20℃冰冻保存2周以上）
4、杂交前将固定的细胞进行如下处理；依次在70%，90%，100%的乙醇中浸泡，脱水每次5min，用二甲苯洗涤，除去残留脂质依次在100%，90%，70%乙醇中浸泡，进行再水化，每次5min，zui后浸泡于洗涤液中；
5、在37℃用胃蛋白酶溶液10min处理固定的细胞，以增加细胞对大分子试剂的通透性，再用洗涤液洗5min；
6、用1%甲醛固定10min，用洗涤液洗净。
注意！
    1、所有溶液都必须用RNA酶抑制剂处理。
    2、操作中重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。