ELISA试剂盒检测试剂每次试验、每块扳上都要设置以下3项对照和用途：
1．空白对照：仅用稀释液代替检测样本、ELISA试剂盒用来观察zui终反应的显色“本底"、ELISA试剂盒并用于酶标仪消除、扣除“本底"，也就是说：以本底为“零"读取阳性、阴性对照孔和样本检测孔的吸光值（A）；或者，在计算阴性对照均值（NCx）、阳性对照均值（PCx）、样本读数的S/C.O.值时减去空白对照的本底吸光值。早期的酶标仪没有自动扣除空白对照孔读数的功能，ELISA试剂盒这种酶标仪现在已经被淘汰了，写上这段话的目的是补充说明设置空白对照的用途。空白孔具体如何读取读数，应该按照说明书操作。
2．阴性对照：

     （1）阴性对照的含义与要求：ELISA试剂盒所谓阴性对照，是本次检测试验中采用与待检测物（样品、人用试剂就是人的血清等）具有同源性和同质性，又不含有待检物质，并且能够客观比较和鉴别处理因素（血清免疫学试验中有特异性抗原与抗体反应）之间的差异。因此，用动物血清或其制品代替阴性人血清作为对照品，无论是从理论还是实践上都是不可取的。注意：据我所知，国产ELISA试剂盒中，有的厂家是用动物血清制品稀释配置或与部分人血清混合配置的；阴性对照读数，并不是“越低越好"。NCx值接近0.00X水平，这是假象！试想一下，真正采用“阴性人血清"的阴性对照品，NCx值会如此之低吗？例如，雅培乙肝六项ELISA试剂盒的NCx值，分别为：0.010（HBsAg）、0.027（抗—HBs）、0.035（HBeAg）、1.083（抗—HBe）、1.065（抗—HBc）、0.045（抗HBc-IgM）。生物梅里埃的HIV试剂NCx是0.091。辨别试剂NCx值是否合理的一个很简单的方法，只要对比大量阴性样本的实际读数就“一目了然"啦！
（2）阴性对照分为两类

     一是受检人血清中并不含有或方法学灵敏度未能检出的待检物的基准水平，并且结果判断值（Cut off）计算式中决定“是"（阳性）、或“否"（阴性）的*可变值。阴性对照值高，导致假阴性；反之，ELISA试剂盒导致假阳性。二是阴性对照设置，在方法学上要求加入指示性定量标准品，ELISA试剂盒如中和剂HBeAg，定量HBcAg等，用以检测抗—HBe、抗—HBc。或者，选取代表平均水平的正常人血清用作阴性对照，ELISA试剂盒如检测抗—HBc IgM。此类Cut off 值计算时，多数均包括阴性和阳性对照值2个可变值。